| [Посетител (183.193.*.*)]отговори [Китайски ] | Време :2021-12-09 | (1) Тип гел
Агар гликогел електрофореза за отделяне на нуклеинови киселини може да бъде разделена на вертикални и хоризонтални (плосък тип). Когато хоризонталната електрофореза, гел плочата е напълно потопена в електродния буфер под 1-2mm, така че е известна и като гмуркане. Понастоящем повече използване на последните, защото е по-удобно да се направи и проба, електрофореза резервоар е прост, лесен за правене, но също така може да се подготви според нуждите на различни спецификации на гел плоча, спестяване гел, и следователно по-популярен.
(2) Буферна система
Когато липсват йони, течението е твърде малко и ДНК-то мигрира бавно;
Общи електрофоретични буфери са EDTA (pH8.0) и Tris-Оцетна киселина (TEA), Трис-борна киселина (TBE) или Трис-фосфат (TPE), с концентрации от приблизително 50 mmol/L (pH7.5 до 7.8). Буферите за електрофореза обикновено се формулират в дебел разтвор за съхранение, разреден до желания кратен, когато се използва.
БУФЕРИРАНЕ TAE е ниско, а последните две имат достатъчно висок буферен капацитет, за да бъдат по-често използвани. Дългосрочно съхранение на TBE дебел разтвор ще се появи валежи, за да се избегне този недостатък, съхранявайте 5000 × разтвор на стайна температура, разреждане на 10 пъти 0,5 × работно решение може да осигури достатъчен буферен капацитет.
(3) Приготвяне на гелове
За разреждане на електродния буфер като разтворител, с кипяща водна баня или микровълнова фурна за приготвяне на определена концентрация на сол, излята в хоризонталната рамка или вертикално фолио, вкарана в гребена, естествено охлаждане.
(4) Подготовка и добавяне на проби
ДНК пробите се разтварят с точното количество буфер Tris-EDTA, което съдържа 0,25% бромирани сини или други индикативни багрила, съдържащи 10%-15% захароза или 5% до 10% глицерин, за увеличаване на специфичната му гравитация и концентриране на пробата. За да се избегне възможността захарозата или глицеринът да произвеждат U-ивици за резултатите от електрофорезата, заменете захарозата или глицерин с 2,5% Ficoll (полисукроза).
(5) Електрофореза
Резултатите от експерименталните условия на ДНК експеримента на макромолекулите за разделяне на агар гел показват, че сепарационният ефект е по-добър при ниска концентрация и ниско напрежение. При условия на ниско напрежение скоростта на електрофореза на линейните ДНК молекули е пропорционална на използваното напрежение. Когато обаче интензивността на електрическото поле се увеличи, увеличаването на скоростта на миграция на по-големи ДНК фрагменти е сравнително малко. Следователно, с увеличаването на напрежението, се намалява резолюцията на електрофорезата, за да се получи максималната разделителна способност на електрофорезата изолирани ДНК фрагменти, силата на електрическото поле не трябва да бъде по-висока от 5V /cm.
Температурата на електрофорезата система не е имала значителен ефект върху електрофорезата поведение на ДНК в агар гел. Електрофорезата обикновено се извършва при стайна температура, и може да се извършва само при 4 градуса С, за да се увеличи твърдостта на гела, когато концентрацията на гела е по-малка от 0,5%.
(6) Боядисване и правене на снимки
Често срещано оцветяване на флуоресцентен багрилен бром етил ингот (ЕБ), наблюдение на ДНК ивици в ултравиолетова светлина, фотография с ултравиолетов анализатор или изход на системата за гел образни снимки и свързан анализ на данни |
|
